（一）染料排除法 

染料排除法的原理是活细胞能够将一些染料排除在外而死细胞无法做到，这是因为活细胞具有完整的细胞膜，对于通过膜通道的小分子具有高度的选择性。

台盼蓝（Diphenyl Blue）是一种带负电荷的约 960 Da 的重氮染料，它只能透过损坏的细胞膜，被死细胞吸收。这种染料可以在体外使用，如细胞培养；也可以在体内使用，如观察活体中的癌细胞群；它还可用于比较不同组别在特定条件下的活细胞数量或增殖率。台盼蓝在实验室的细胞计数中应用广泛，死细胞染色后在显微镜下会变蓝，活细胞不染色，且外观清晰。

尽管这种方法有许多优点，包括经济、易于应用，但它无法区分细胞凋亡或坏死，且灵敏度非常有限。
 

（二）基于细胞代谢的增殖分析实验

1.MTT 法

MTT 法基于 MTT 在线粒体 NAD(P)H 依赖型氧化还原酶催化下转化成不溶性甲瓒，生成的甲瓒可以反映线粒体的活性，并可由此来确定活细胞的数量。增殖细胞具有更高的 MTT 转化率，而缓慢生长细胞的低代谢率导致了较低的 MTT 转化率。应用 MTT之后，用 DMSO 或者洗涤剂十二烷基硫酸钠去溶解甲瓒晶体，甲瓒的浓度便可以利用分光光度计进行检测，波长范围为 540 到 720 nm。

MTT 法常用于分析药物在不同条件或者浓度的细胞毒性作用，也可用于比较药物组和对照组细胞活力从而测定药物的 IC50 值，有助于确定药物的体外作用以及预测临床应用。另一方面，由于检测期间会杀死所有细胞，因此该方法可能会对后续的研究带来不便。此外，它无法区分细胞毒性和细胞抑制作用，在细胞数目较少时结果可信度不高。

MTT 法原理【线粒体 NADH 通过脱氢酶转化为 NAD+，该反应导致活细胞中的黄色四氮唑盐（MTT、XTT、MTS 和 WST）还原为紫色的甲瓒晶体。】

水溶性四氮唑盐即 WST 已被开发为新一代的细胞活性测定化合物，它同样可在活细胞线粒体中的NADH酶作用下转化为甲瓒晶体。此外，在 PMS 存在的情况下，WST-1 和 WST-8 比 XTT 及 MTS 结果稳定性更好、检测灵敏度更高。此外，WST 法无需额外的晶体溶解步骤，其试剂具有即开即用的特点，能够帮助研究者更快地完成实验。

LDH 释放实验

【损伤或死亡细胞释放的 LDH 催化乳酸氧化为丙酮酸，NAD+ 还原为 NADH 分子。产生的 NADH 被黄递酶用于将  INT（四氮唑盐）转化为红色甲瓒晶体，并进行比色测量。】

LDH释放实验

（荧光素酶利用细胞 ATP 催化外源性荧光素转化为氧化荧光素，氧化荧光素产生的荧光被光度计捕捉并测量。）

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参考文献：

Adan A, Kiraz Y, Baran Y. Cell Proliferation ａnd Cytotoxicity Assays. Curr Pharm Biotechnol. 2016;17(14):1213-1221.doi:10.2174/1389201017666160808160513

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